通过表达小鼠Na+,K+-ATPaseα子单元的cDNA而获得的Ouabain耐药性

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 灵长类动物和动物的细胞对心脏糖化物ouabain的敏感性有显著的差异.
• 在大多数动物细胞中,依赖Na+和K+的腺三酸盐酶 (Na+/K+-ATPase) 对于维持细胞离子梯度至关重要.

研究的目的:

• 为了阐明灵长类动物和动物细胞之间的差异ouabain灵敏性的分子基础.
• 使用遗传方法研究Na+/K+-ATPaseα1亚单元的结构功能关系.

主要方法:

• 克隆并将编码小鼠Na+/K+-ATPaseα1亚单元的补充DNA (cDNA) 插入pSV2表达向量中.
• 用工程DNA分子感染子CV-1细胞.
• 检测转染细胞中的ouabain耐药性.
• 阿尔法1亚单元cDNA的删除突变发生,以识别关键的功能域.

主要成果:

• 改造的DNA分子在子CV-1细胞中对10(-4) M ouabain产生了耐药性.
• 删除编码alpha 1亚单元的碳素末端的序列取消了ouabain的抗药活性.
• 全长的α1亚单元cDNA作为ouabain敏感细胞中的主导可选择标记物的功能.

结论:

• 对Na+/K+-ATPaseα1亚单元的基因操纵可以赋予ouabain耐药性,解释了不同的敏感性.
• 分子遗传技术适用于研究Na+/K+-ATPase结构-功能关系.
• 小鼠α1亚单元cDNA所赋予的ouabain耐药性是体细胞遗传学的宝贵工具.