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从人类胎盘中克隆两种GAP互补DNA的分子克隆
M Trahey1, G Wong, R Halenbeck
1Department of Molecular Biology, Cetus Corp., Emeryville, CA 94608.
Science (New York, N.Y.)
|December 23, 1988
概括
研究人员在人类胎盘中发现了两种形式的ras p21 GTPase激活蛋白 (GAP). 一种形式类似于牛GAP,在各种组织中发现,而一种新的,较小的GAP形式是由替代拼接生成的,在胎盘和细胞系中丰富.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
- 遗传学 是一个遗传学.
背景情况:
- 拉斯GTPase激活蛋白 (GAP) 调节了拉斯p21的活动.
- 了解GAP的结构和功能对于细胞信号研究至关重要.
研究的目的:
- 从胎盘组织中分离和描述人类ras p21 GAP.
- 识别不同形式的GAP及其表达模式.
主要方法:
- 从人类胎盘中净化ras p21 GAP.
- 氨基酸测序用于设计互补DNA (cDNA) 探针.
- 隔离和表征编码GAP的cDNA克隆.
- 使用北方涂抹或类似技术进行信使RNA (mRNA) 表达分析.
主要成果:
- 两种类型的人类GAPcDNA克隆被分离出来.
- 一个克隆编码了116,000达尔顿的GAP,与牛GAP高度同源,在多个成年组织中检测到mRNA.
- 第二个克隆编码了一个新的100400达尔顿的GAP,缺乏疏水性N端,但保留了活性,通过替代拼接生成,在胎盘和细胞系中丰富,但不是成年组织.
结论:
- 人类胎盘至少表达了两种不同形式的ras p21 GAP.
- 替代拼接生成了一个新的GAP异型,具有改变的N端和特定的表达模式.
- 这些发现有助于理解人类细胞中GAP功能的多样性和调节.