分子克隆和人类粒细胞殖民地刺激因子cDNA的表达

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 血液学 血液学 血液学

背景情况:

• 颗粒细胞殖民地刺激因子 (G-CSF) 是一种对调节血细胞生产至关重要的糖蛋白.
• 一个人类口腔状癌细胞系 (CHU-2) 被确定为构成性地产生大量的G-CSF.

研究的目的:

• 为了确定净化G-CSF的部分氨基酸序列.
• 从CHU-2细胞系中分离和描述G-CSF补充DNA (cDNA).
• 为了研究正常细胞和CHU-2细胞中的G-CSF基因结构.

主要方法:

• 从CHU-2细胞调节介质中净化G-CSF.
• 净化G-CSF的氨基酸测序.
• 从CHU-2信使RNA构建一个cDNA库.
• 氧核酸探测以分离G-CSFcDNA克隆.
• G-CSF cDNA 的核酸序列化.
• 在子COS细胞中G-CSFcDNA的表达.
• 基因组DNA的南方杂交分析.

主要成果:

• 确定了G-CSF的部分氨基酸序列.
• 从CHU-2细胞系中分离出多个G-CSFcDNA克隆.
• 在COS细胞中表达的cDNA产生了生物活性G-CSF.
• 南方杂交表明人类基因组中只有一个G-CSF基因.
• 在CHU-2细胞中观察到G-CSF基因等位体内的重组.

结论:

• 该研究成功分离和表征了G-CSFcDNA,证实了它在颗粒细胞生产中的作用.
• 这些发现表明,人类中存在单个G-CSF基因位点,癌细胞中存在潜在的等位基因变异.