基于氧化酶的模块化报告器,用于检测保护酶活性和与时间的蛋白质相互作用
Guanwei Zhou1,2, Wei Wei Wan1,3, Wenjing Wang1,2,3
1Life Sciences Institute, University of Michigan, Ann Arbor, Michigan 48109, United States.
Journal of the American Chemical Society
|December 13, 2022
概括
研究人员开发了CLAPon,一个模块化的酶记者系统,用于研究生物过程. 这种多功能平台可通过增强信号放大来灵敏地检测蛋白酶活性和蛋白质相互作用.
科学领域:
- 生物化学
- 分子生物学
- 细胞生物学
背景情况:
- 酶报道器通过信号放大来研究生物过程具有很高的灵敏度.
- 需要模块化图案来创建多种类型的酶记者.
- 增强的酸盐过氧化酶 (APEX) 是记者发育的一个关键酶.
研究的目的:
- 开发一种基于过氧化酶的模块化基因,用于设计多功能酶记者.
- 证明CLAPon动机在检测蛋白酶活性和蛋白质相互作用 (PPI) 中的实用性.
- 让记者有时间和化学隔离等先进功能.
主要方法:
- 开发了CLAPon (酸线圈式APEX) 的模块化设计.
- 用于检测蛋白酶活动的基于CLAPon的报告器的设计和测试.
- 用于检测蛋白质与蛋白质相互作用的PPI-CLAPon变体 (1.0和1.1) 的工程.
- 开发光门 (LiPPI-CLAPon) 和化学门的报道器.
主要成果:
- 在切割时,CLAPon的蛋白酶活性增加了390倍.
- 对于具有亚细胞分辨率的高亲和度 PPI,PPI- CLAPon1. 0 的信号噪声比 (SNR) 达到了107.
- LiPPI-CLAPon1.0检测出3分钟的依赖的PPI,其SNR为17.
- 化学关口PPI-CLAPon1.0提供了额外的多功能性.
结论:
- CLAPon模式为设计基因编码报告器提供了一个模块化和多功能平台.
- 基于CLAPon的报告器在研究各种信号过程中的蛋白酶活性和PPI方面是有效的.
- 工程记者为高级生物研究提供时间和化学门.


