在Pichia pastoris中表达的优化Codon Bovine III型干扰素的生物活性

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 第三类干扰素 (IFN-λs) 对于抗病毒防御和免疫调节至关重要.
• 牛干扰素-lambda 3 (boIFN-λ3) 有潜在的治疗应用.
• 优化基因表达和蛋白质生产是开发生物制药的关键.

研究的目的:

• 为了合成和表达子优化的牛干扰素-lambda (boIFN-λ) 基因片段.
• 通过SOE PCR开发一个突变的版本,boIFN-λ3^V18M,通过SOE PCR.
• 评估boIFN-λ3和boIFN-λ3^V18M的生物活性和治疗潜力.

主要方法:

• 子优化和boIFN-λ的基因合成.
• 通过重叠扩展PCR (SOE PCR) 进行基因放大.
• 在 *Pichia pastoris* 中的重组蛋白表达,净化和表征.
• 抗病毒和抗增殖试验,包括稳定性和细胞毒性试验.

主要成果:

• 在Pichia pastoris*中实现了boIFN-λ3和boIFN-λ3^V18M的高水平细胞外可溶性表达.
• 纯化的重组蛋白质产生1.5g/L (boIFN-λ3) 和0.3g/L (boIFN-λ3^V18M) 的高纯度.
• boIFN-λ3^V18M表现出强大的抗病毒活性 (>10^{6 U/mg) 和抗增殖作用,没有细胞毒性.}
• 这两种蛋白质都表现出类似的生物活性,boIFN-λ3^V18M降低了糖化.

结论:

• 成功开发和大规模生产重组boIFN-λ3和boIFN-λ3^V18M.
• boIFN-λ3^V18M显示出强大的抗病毒和抗增殖特性,与野生类型相比.
• 这些发现提供了对干扰素-lambda机制的见解,并支持治疗开发.