开发一种基于磁珠的快速,高效和可重复使用的免疫捕获系统,用于从酵母发酵中分离复合人类二型协同原
Martina Lioi1, Sara Tengattini1, Francesca Bagatin2
1Department of Drug Sciences, University of Pavia, Viale Taramelli 12, 27100, Pavia, Italy.
Analytical and bioanalytical chemistry
|May 29, 2023
概括
我们开发了一种使用磁珠和抗体的可重复使用的免疫捕获系统,以有效地将人类的公原II从酵母发酵中分离出来. 这种方法简化了对复合原蛋白生产质量和完整性的监测.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物化学 生物化学
- 再组合蛋白质的生产生产.
背景情况:
- 传统的从动物来源提取原蛋白在可扩展性和质量控制方面面临限制.
- 由于复杂的生物矩阵和常见分析方法的信息限制,监测发酵中的复合性公原/原表达具有挑战性.
研究的目的:
- 开发一种简单,高效和可重复使用的免疫捕获系统,用于从发酵中分离人类II型公原.
- 为了能够详细地描述分离的公原,支持发酵过程的监测.
主要方法:
- 使用的蛋白质A涂层磁珠功能化并与人类抗前原II抗体交叉连接.
- 优化的结合和释放条件,用于特定的procollagen捕获.
- 通过RP-LC-HRMS使用合成抗原和映射验证的特异性和非特异性相互作用的缺失.
主要成果:
- 在磁珠上实现了97.7%的平均抗体固定收益率.
- 证明了公素的特定和可重复的结合.
- 在21天内确认了生物激活支持的稳定性和可重复使用性.
- 在原始酵母发酵样本上成功测试了该系统.
结论:
- 开发的免疫捕获系统提供了一种强大的方法,用于从重组酵母发酵中分离和表征人体公原II.
- 这种方法有助于监测复合原蛋白生产过程的效率和质量.
