在体内定量FRET小动物成像:强度与基于一生的FRET
Jason T Smith1, Nattawut Sinsuebphon1, Alena Rudkouskaya2
1Center for Modeling, Simulation and Imaging in Medicine (CeMSIM), Rensselaer Polytechnic Institute, Troy, New York.
Biophysical reports
|May 30, 2023
概括
宏观光寿命 (MFLI) -FRET在体内成像中比基于强度的FRET提供了显著的优势. MFLI-FRET需要较少的测量和动物,使其成为临床前药物输送研究的理想选择.
科学领域:
- 生物物理学和生物医学成像学
- 分子相互作用和分子动力学
背景情况:
- 福斯特共振能量转移 (FRET) 显微镜对于监测分子相互作用和构造变化 (2-10纳米范围) 是至关重要的.
- 在癌症模型中,FRET越来越多地在体内用于药物向参与和释放量化,使用标记探头.
研究的目的:
- 为了比较基于强度的FRET (敏感发射) 和宏观光寿命 (MFLI) 的FRET,用于小型动物的光学体内成像.
- 详细说明分析表达式和实验协议,以量化FRET效率 (E) 和所涉及的捐赠分子分数 (p).
主要方法:
- 将敏感发射FRET (三立方体方法,IVIS成像仪) 与MFLI-FRET (定制时隔强化CCD系统) 进行比较.
- 在活体中使用近红外标记的FRET对在活体小鼠中量化转激素受体-转激素结合动态.
- 在体内比较的结果与体内FRET使用杂交的寡核酸.
主要成果:
- 这两种体内成像技术都显示了类似的受体-连接体参与的动态趋势.
- 与基于强度的FRET相比,MFLI-FRET所需的测量量显著减少 (1对9) 和动物 (1对3).
- MFLI-FRET在效率方面表现出显著的优势,并减少了体内定量化实验的复杂性.
结论:
- MFLI-FRET是纵向临床前FRET研究的首选方法,包括对活小鼠进行向药物输送.
- 该研究提供了详细的协议,用于量化FRET效率和活体供体分数.
