在小鼠角膜内皮中对空间时空基因向

科学领域:

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背景情况:

• 可诱导的Cre-ERT2重组酶系统使基因向的时间控制成为可能,这对于研究具有重要发育作用的成年基因功能至关重要.
• 泽布1参与了介质细胞过渡,这是与纤维化疾病相关的过程.

研究的目的:

• 创建一个Zeb1条件淘汰赛小鼠模型 (Zeb1^flox/flox:UBC-CreERT2),用于研究Zeb1在角膜内皮介质转换中的作用.
• 建立一种方法,在小鼠角膜内皮中定位Zeb1的时间和空间.

主要方法:

• Zeb1^flox/flox的生成:通过将UBC-CreERT2小鼠与Zeb1^flox/flox小鼠交叉结合,从而产生UBC-CreERT2小鼠.
• 通过-4-hydroxytamoxifen (4-OHT) 给药诱导Zeb1的功能丧失,导致第6个外显子的切除.
• 室内4-OHT注射以针对Zeb1特别是在前腔室.
• 在活体器官培养中使用FGF2诱导介质过渡和Zeb1表达.
• 使用半定量RT-PCR和免疫染对基因表达的分析.

主要成果:

• 在内腔内注射4-OHT后,在Zeb1^flox/flox:UBC-CreERT2小鼠中实现了Cre介导的Zeb1向.
• 在ex vivo器官培养中FGF2治疗导致角膜内皮中Zeb1mRNA和蛋白质表达的废止.
• 这表明在目标细胞中成功地条件淘汰了Zeb1.

结论:

• Zeb1是角膜内皮介质中介细胞过渡中纤维化的关键调解者.
• 室内注射4-OHT允许在小鼠角膜内皮 in vivo 中进行针对性的Zeb1操纵.
• 可诱导的Cre-Lox策略可用于研究成年角膜疾病中发育重要基因的作用.