免疫质谱工作流程用于量化血清α-fetoprotein使用抗体固定磁珠和修改的 Eluents 的量化

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 免疫质谱 (MS) 对于在生物样本中量化低丰度蛋白质至关重要.
• 有效地从纳米载体上的抗体-抗原复合体中分离目标抗原对于免疫-MS准确性至关重要.
• 蛋白质水解可以直接发生在珠子上,也可以在纳米载体表面的化后发生.

研究的目的:

• 为了优化免疫亲和性净化条件,用化方法量化低丰度蛋白质.
• 建立一个强大的工作流程来检测和测量生物流体中的生物标志物.
• 通过量化人类血清中的内源性α-fetoprotein (AFP) 来验证该方法的准确性.

主要方法:

• 使用抗体涂层的磁珠净化血清α-fetoprotein (AFP) 的免疫 afinity.
• 从抗体涂层珠子中优化AFP化,使用各种化剂,包括有机溶剂.
• 化AFP的蛋白质溶解水解,然后通过液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 量化,使用稳定同位素标记的标准.

主要成果:

• 一个优化的免疫-MS工作流显示,高峰AFP水平与测量重与轻的比率之间存在强烈的相关性.
• 该方法准确量化了正常人血清中的内源性AFP,其度为2.3±0.6 ng/mL.
• 结果与已建立的放射性免疫检测方法一致,验证了优化的工作流.

结论:

• 开发的免疫-MS工作流程有效地从复杂的生物矩阵中净化和量化低丰度蛋白质,如AFP.
• 这种优化的方法为血清中的生物标志物定量提供了可靠的方法.
• 免疫-MS工作流具有广泛的适用性,用于检测和量化生物流体中的其他低丰度生物标志物.