从HEK293细胞系衍生的高蛋白质质量和数量的稳定池中生产蛋白质,以支持发现研究

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 蛋白质表达方式
• 哺乳动物细胞培养

背景情况:

• 哺乳动物表达系统对于产生抗体治疗药物和具有类似人类的翻译后修改的重组蛋白质至关重要.
• 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞被广泛使用,但可能导致蛋白质剪切和不必要的非人类后翻译修饰 (PTM).
• 由于糖化模式阻碍X射线结晶学,CHO细胞也对结构生物学构成挑战.

研究的目的:

• 开发一种替代性哺乳动物细胞系用于重组蛋白表达,克服CHO细胞的局限性.
• 建立一种可靠的方法来产生稳定的HEK293衍生细胞池,用于高产蛋白生产.
• 为了促进结构生物学应用的简化糖化蛋白质的蛋白质生产.

主要方法:

• 使用人类胚胎脏293 (HEK293) 细胞开发稳定池生成协议.
• 对HEK293S GnTI和Expi293F GnTI悬浮电池的协议的调整.
• 蛋白质表达水平和质量的比较与CHO细胞和暂时转移的HEK293细胞.

主要成果:

• 与CHO细胞相比,HEK293衍生的稳定池产生了重组蛋白质,剪切显著减少.
• 来自稳定的HEK293池的蛋白质产量超过了短暂转化HEK293细胞的蛋白质产量.
• 该协议使得使用HEK293S GnTI和Expi293F GnTI细胞,能够生产具有较少复杂的甘氨酸的蛋白质,适合结构生物学.
• Expi293F GnTI-稳定池的表达水平与HEK293S GnTI-稳定池的表达水平相似或更高.

结论:

• 来自HEK293的稳定池为生产高质量的重组蛋白质提供了一个强大的平台.
• 这种方法为CHO细胞提供了具有成本效益的替代方案,提高了蛋白质产量并减少了不必要的修改.
• 这种方法对结构生物学研究非常有价值,因为这些研究需要具有简化糖化模式的蛋白质.