一种用于并行微观蛋白质标记和精确控制平均标记度 (aDoL) 的方法
1Applied Research and Technology, Abbott Diagnostics Division, AP-20, Abbott Laboratories, 100 Abbott Park Road, Abbott Park, IL, 60064-6016, USA. Qiaoqiao.ruan@abbott.com.
Scientific reports
|June 2, 2023
概括
这项研究引入了使用无铜点击化学进行精确蛋白质标记的两步协议. 这种方法增强了对标签程度 (DoL) 的控制,并为平行微观标签提供了更简单,更经济的方法.
科学领域:
- 生物结合化学 生物结合化学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 通过氨酸残留物和活性的传统蛋白质结合在控制标记 (DoL) 的程度方面面临挑战.
- 活性的不稳定性和可变的反应效率限制了标准标签方法的精确控制.
研究的目的:
- 开发一个强大的协议,使用无铜点击化学精确控制蛋白质标记度 (DoL).
- 为平行微量蛋白质标签提供简化,经济和高效的方法.
主要方法:
- 一个两步反应协议,涉及初始蛋白质激活与阿齐德-NHS (N-Hydroxysuccinimide).
- 亚酸激活蛋白的后续反应与有限量的补充点击标签.
- 在第一步后的净化,在点击反应之前去除未反应的试剂.
主要成果:
- 点击标签在24小时内完全与亚酸激活蛋白反应,不需要反应后的净化.
- 获得的DoL直接对应于点击标签与蛋白质的输入摩尔比率.
- 使用0.5毫克抗体,证明了用9种不同的光体对抗体进行并行微观标记.
- 实现了针对抗体标记的2至8的目标DoL值.
- 与使用标准NHS-光剂方法标记的合光剂相比,结合光剂的稳定性更强.
结论:
- 开发的无铜点击化学协议为蛋白质标记度 (DoL) 提供了更好的控制.
- 这种方法简化并降低了并行微观蛋白质标签的成本.
- 与传统方法相比,点击化学方法的结果是更稳定的蛋白质结合物链接.
