一个新的双等离子体平台提供了可扩展的转染,在多个AAV血清型和基因组中提高了生产力和包装

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 基因治疗制造业 基因治疗制造业

背景情况:

• 过渡性转染是产生腺相关病毒 (AAV) 载体的关键方法.
• 目前的AAV生产通常依赖于三等离子体系统.
• 之前的双等离子体系统 (pDG) 显示出与三重转染相比较的生产率.

研究的目的:

• 引入和评估一个新的双质粒系统,POXB,用于AAV矢量生产.
• 为了比较pOXB的生产率和效率与已建立的三重传递和pDG双等离子体系统.
• 评估使用POXB系统生产的AAV载体的可扩展性和体内性能.

主要方法:

• 开发了新的pOXB双质粒系统.
• 使用pOXB,pDG和三重等离子体系统的哺乳动物细胞的暂时转移.
• 评估AAV载体的生产率和完全捕获的百分比.
• 在七个重组AAV基因组和多个囊血清型中进行测试.
• 在50L生物反应器尺度下进行可扩展性评估.
• 生产的载体的体内性能评估.

主要成果:

• 与pDG和三重转染相比,POXB双等离子体系统显著提高了AAV载体的生产率和全体的百分比.
• 在各种AAV基因组和体血清型中观察到可重现的结果.
• pOXB系统证明了可扩展到50L生物反应器规模的可扩展性.
• 纯化的AAV载体显示出一致的产品质量,使用pOXB.改善了完整的基因组包装.
• 通过pOXB双和三重转移产生的载体在体内始终保持一致.

结论:

• pOXB双等离子体系统代表了AAV制造中的重大创新.
• pOXB提供了实质性的过程收益,包括提高生产率和改进的全体包装.
• 这种系统保持了AAV矢量生产的过渡转染平台的灵活性.
• 提高效率和一致的性能使POXB成为基因疗法制造的宝贵进步.