开发一种通用实时RT-PCR测定方法,用于检测泛SARS冠状病毒,并使用基于RNA的内部控制
Beibei Yu1,2, Changping Xu3, Shiwang Huang4
1Department of Clinical Laboratory, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University College of Medicine, Hangzhou, China.
Frontiers in microbiology
|June 5, 2023
概括
一种新的通用RT-qPCR测定方法可以快速检测泛冠病毒,包括SARS-CoV-2及其变种. 这种诊断工具对于在疫情期间监测人类和动物种群至关重要.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 公共卫生 公共卫生
背景情况:
- 随着COVID-19的流行,急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 的快速诊断测试的必要性得到了强调.
- 现有的诊断方法缺乏用于在人类和动物种群中广泛检测泛SARS-冠状病毒 (泛SARS-CoV) 的验证试验.
- 有效的病毒学监测需要对新出现和重新出现的冠状病毒进行敏感和特定的诊断工具.
研究的目的:
- 为快速检测泛SARS冠状病毒开发和验证一种通用的反转录定量聚合酶连锁反应 (RT-qPCR) 试验.
- 设计针对包裹 (E) 基因的创新原料,用于泛SARS-CoV诊断.
- 建立基于RNA的内部控制,使用人类β2-微球蛋白 (B2M) 进行测定过程验证.
主要方法:
- 利用了一种新的原料设计策略,针对SARS-冠状病毒的保存包裹 (E) 基因.
- 开发了一套专门用于人类β2-微球蛋白 (B2M) 的初始检测装置,作为内部控制.
- 进行了分析验证,包括检测极限 (LOD) 确定和针对常见呼吸道病毒的特异性测试.
- 通过120个人的口腔样进行了临床验证.
主要成果:
- 通用RT-qPCR试验显示高特异性,没有对其他人类冠状病毒或20种常见的呼吸道病毒的交叉反应.
- 该试验在95%的检测概率下达到159.16副本/毫升的检测极限 (LOD).
- 临床验证显示,在口腔样中检测SARS-CoV-2的灵敏度为100%,包括武汉,三角洲和Omicron变种.
- 该试验有效检测到SARS-CoV-1,SARS-CoV-2和来自动物的SARS相关的CoV.
结论:
- 开发的通用RT-qPCR测定是一种高度敏感,强大和快速的诊断工具,用于泛SARS-CoV检测.
- 这种试验适用于人类和野生动物群体的密集病毒学监测.
- 该分析为管理当前和未来的冠状病毒爆发提供了宝贵的资源.
