在初级牛乳腺上皮细胞中成功编辑和维持乳基因表达

科学领域:

• * 动物科学 动物科学
• * 细胞生物学 * 细胞生物学
• * 生物技术 * 生物技术

背景情况:

• * 牛乳的体外模型受到培养细胞中乳特异性基因表达不良的限制.
• * 初级牛乳腺上皮细胞 (pbMECs) 在经过几次通道后失去关键基因的表达,阻碍了研究.
• *缺乏生理学上具有代表性的细胞模型,阻碍了对牛乳生成和遗传影响的研究.

研究的目的:

• * 通过使用初级牛乳腺上皮细胞 (pbMECs) 开发改进的体外模型.
• * 调查基因编辑和培养条件对乳基因表达的影响.
• *建立一个强大的系统来研究牛乳腺组织的遗传变异.

主要方法:

• *开发CRISPR-Cas9基因编辑方法,以高效改造pbMECs.
• * 在Matrigel上培养pbMEC,以促进具有代表性的乳原基因表达特征和3D结构形成.
• *优化光激活细胞分类 (FACS) 以选择CRISPR-Cas9编辑的细胞 (DGAT1淘汰).

主要成果:

• * 在Matrigel上培养pbMEC恢复了更具代表性的乳基因表达特征.
• *CRISPR-Cas9基因编辑在初级乳腺细胞中实现了高效率.
• * 已建立的方法可以选择基因编辑细胞,例如DGAT1淘汰pbMECs.

结论:

• *Matrigel培养和CRISPR-Cas9基因编辑的结合显著改善了pbMECs作为牛哺乳研究的模型.
• *这些改进的模型有助于研究影响牛奶合成的基因内进和遗传变异.
• *开发的技术为推进牛乳生物学和乳制品科学研究提供了宝贵的平台.