循环介导同热放大 (LAMP) /Cas12a试验用于检测循环介导同热放大
Zhiyu Fan1, Yuxia Mei1, Jiawei Xing1
1State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Life Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, China.
Frontiers in bioengineering and biotechnology
|June 7, 2023
概括
一种新的测定方法结合了循环介导的同热放大 (LAMP) 和CRISPR/Cas12a,用于快速检测Ralstonia solanacearum (RS),这种细菌导致番茄细菌枯. 这种方法为早期疾病识别提供了一种敏感的,可在现场部署的工具.
科学领域:
- 植物病理学 植物病理学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 由Ralstonia solanacearum (RS) 引起的细菌 (BW) 对全球农业构成重大威胁.
- 番茄的细菌枯,特别是亚洲类型I的RS,造成了巨大的经济损失,特别是在中国南部.
- 有效控制BW需要快速,灵敏和准确的RS检测方法.
研究的目的:
- 开发一种新的,快速和灵敏的Ralstonia solanacearum (RS) 检测试剂.
- 评估用于现场应用的联合循环介导同热放大 (LAMP) 和CRISPR/Cas12a系统的潜力.
- 建立一个有效的点照顾测试 (POCT) 早期检测番茄细菌枯.
主要方法:
- 通过将循环介导同热放大 (LAMP) 与CRISPR/Cas12a技术相结合,开发了一种新型检测方法.
- 针对RS的hrpB基因的一种特定的CRISPRRNA (crRNA1) 因其高跨裂变活性而被选择.
- 视觉检测方法,包括光和侧流条,用于结果解释.
主要成果:
- 该LAMP/Cas12a试验在检测RS类型I的高灵敏度和特异性.
- 实现了低检测极限,在14个测试菌株中准确识别了RS (降至2.0 × 10^0副本).
- 该试验成功地在受感染的西红茎和现场土壤样本中确定了RS,验证了其实际应用.
结论:
- 开发的LAMP/Cas12a测定是一种高度敏感和特定的工具,用于检测Ralstonia solanacearum.
- 这种测试显示出很有前途的治疗点测试 (POCT),用于实地诊断番茄细菌.
- 测试的快速 (不到2小时) 和无设备的性质使其成为疾病监测的有效和廉价选择.
