通过降低rnpA基因表达来增强难以表达的蛋白质的产生
Hannah Chung1,2, Jiyong Kim1,2, Yong Jae Lee3,4
1Metabolic and Biomolecular Engineering National Research Laboratory, Department of Chemical and Biomolecular Engineering (BK21 four), Institute for the BioCentury, Korea Advanced Institute of Science and Technology, Daejeon, Republic of Korea.
Biotechnology journal
|June 7, 2023
概括
研究人员开发了一种简单的策略,通过减少RnpA的表达来改善大肠杆菌的重组蛋白质生产. 这种方法增强了信使RNA (mRNA) 的稳定性,使难以表达的蛋白质能够有效地产生.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 大肠杆菌是复合蛋白生产的常见宿主,但对于某些蛋白质存在挑战.
- 使者RNA (mRNA) 的稳定性是影响重组蛋白产量的关键因素.
- 由RnpB和RnpA子单元组成的Ribonuclease P (RNase P) 参与tRNA成熟.
研究的目的:
- 开发一种提高mRNA稳定性和改善大肠杆菌重组蛋白质生产的总策略.
- 研究降低RnpA水平以提高蛋白质产量的潜力.
- 为了证明这种策略在生产多样化和具有挑战性的重组蛋白质方面的适用性.
主要方法:
- 应用一种基于RNA的合成小调节性淘汰系统,以减少RnpA的表达.
- 在重组大肠杆菌菌株中使用RnpA淘汰系统,用于蛋白质过度表达.
- 料批培养的优化,用于高产的特定重组蛋白的生产.
主要成果:
- 成功过度表达23种不同的重组蛋白,包括Cas9,抗体碎片和蜘蛛丝蛋白.
- 对于284.9-kDa的蜘蛛丝蛋白,获得了1.38 g/L的生产产量,这与以前的方法相比是显著的改进.
- 证明了RnpA淘汰系统在生产难以表达的蛋白质方面的有效性.
结论:
- RnpA淘汰策略是一种广泛适用的方法,用于增强E. coli中的重组蛋白质生产.
- 这种方法通过增加mRNA稳定性,显著提高了具有挑战性的重组蛋白的产量.
- 开发的系统为生物技术和生物制药行业提供了有价值的工具.
