优化 piggyBac 转体子介导的基因转移方法在普通大黄蜂胚胎中

科学领域:

• 遗传学 是一个遗传学.
• 发展生物学 发展生物学
• 神经科学是一个神经科学.

背景情况:

• 非人类灵长类动物模型对于开发治疗人类疾病,特别是神经退行性疾病的疗法至关重要.
• 通常用于转基因的lentiviral载体具有有限的载荷容量 (高达8kb).
• 常见的鱼是一个有前途的实验模型,现有的转基因模型是通过lentiviral vectors生成的.

研究的目的:

• 优化 piggyBac 转子子介导的基因转移方法,用于将长于 8 kb 的转基因引入 marmoset 胚胎.
• 建立一种可靠的方法,用于为疾病研究生成转基因非人类灵长类动物.

主要方法:

• 构建一个携带阿尔茨海默病相关基因的长 piggyBac 载体.
• 将 piggyBac 载体和转移酶 mRNA 注入 marmoset 胚胎的 perivitelline 空间,然后进行电穿孔.
• 使用小鼠胚胎优化转基因载体与转基因酶mRNA重量比.

主要成果:

• 在最佳条件下 (1000 ng转基因和转基因酶mRNA) 在70.7%的小鼠胚胎干细胞中产生了转基因集成.
• 在优化条件下,成功地将长转基因引入小熊猫胚胎.
• 治疗后大黄蜂胚胎的高存活率 (100%),70%的胚胎中检测到转基因.

结论:

• 开发的piggyBac转子子介导基因转移方法有效地克服了隐形病毒载体的尺寸限制.
• 这种方法可以有效地对具有长转基因的鸟胚胎进行基因改造.
• 该技术有可能在非人类灵长类动物和其他大型动物中进行基因工程应用,用于疾病建模.