对于整个多细胞瘤球体的生成和自动对焦成像的协议
Benjamin Genenger1, Luke McAlary1, Jay R Perry1
1School of Chemistry and Molecular Bioscience, University of Wollongong, Wollongong, NSW, Australia; Illawarra Health and Medical Research Institute, Wollongong, NSW, Australia.
STAR protocols
|June 10, 2023
概括
这项研究介绍了全球体免疫光染色和成像的协议. 该方法优化了在临床前研究中复杂的3D多细胞瘤球体 (MCTS) 的染色和共聚焦显微镜.
科学领域:
- 在瘤学瘤学.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 多细胞瘤球体 (MCTS) 是有价值的临床前模型.
- 它们的3D结构给免疫光染色和成像带来了挑战.
- 标准协议在MCTS中经常与透和信号统一性作斗争.
研究的目的:
- 开发一个强大的协议,用于整个球体的免疫光染色.
- 为了使用共聚焦显微镜实现MCTS的自动化,高分辨率成像.
- 克服目前分析3D瘤模型的方法的局限性.
主要方法:
- 关于MCTS培养,播种和转移的详细协议.
- 优化固定和免疫光染色程序,使用特定的试剂度和化时间.
- 基于糖的光学清除,用于增强光线透.
- 激光扫描共聚焦显微镜用于自动成像.
主要成果:
- 成功地实现了整个球体的染色,保留了3D结构.
- 优化的协议显示了信号噪声比和染色均性的改善.
- 自动对焦成像提供了高分辨率的定量数据.
- 糖清除有助于深层组织透成像.
结论:
- 提出的协议有效地解决了MCTS免疫光学方面的挑战.
- 这种方法可以对3D瘤模型进行全面分析.
- 使用MCTS促进先进的临床前研究和药物开发.
