通过RPA-CRISPR/Cas12a调解的异热放大,用于视觉检测Phytophthora sojae
Yufang Guo1, Hongming Xia1, Tingting Dai1
1Co-Innovation Center for the Sustainable Forestry in Southern China, Nanjing Forestry University, Nanjing, Jiangsu, China.
Frontiers in cellular and infection microbiology
|June 12, 2023
概括
一种新的检测方法可以准确地检测到大豆病原体Phytophthora sojae,这是一种毁灭性的大豆病原体. 这种快速而灵敏的方法使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 和CRISPR/Cas12a用于在大豆田中可靠的疾病诊断.
科学领域:
- 植物病理学 植物病理学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 植物豆 (Phytophthora sojae) 是一种主要的病原体,在全球大豆 (Glycine max) 生产中造成重大损失.
- 准确及时诊断P. sojae对于有效的疾病管理至关重要,因为症状可能会与其他Phytophthora物种混.
研究的目的:
- 开发一种快速,灵敏和特定的Phytophthora sojae的诊断试验.
主要方法:
- 使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR/Cas12a系统相结合,用于检测P. sojae.
- 对一组相关和非相关的微生物验证了试验的特异性.
- 通过使用不同度的P. sojae基因组DNA来评估测试的灵敏度.
主要成果:
- 该试验显示出高特异性,正确识别了29个P. sojae分离物,同时对其他物种的64个分离物产生了负结果.
- 获得了高灵敏度,在37°C的温度下,在20分钟内检测到P. sojae基因组DNA的仅为10 pg/μL.
- 成功检测到P. sojae在自然接种的大豆 hypocotyls中,并验证了根球样本中的性能.
结论:
- 开发的RPA-CRISPR/Cas12a测定是一种敏感,高效和方便的工具,用于检测P. sojae.
- 这种测试有潜力发展为现场部署的套件,用于监测大豆根腐烂.
