使用生物生成¹³C标记的多个内部标准的优点,用于稳定同位素辅助LC-MS基脂管药物

科学领域:

• * 分析化学 分析化学
• * 生物化学 * 生物化学
• * 质谱测量 质谱测量

背景情况:

• *精确的脂质量测量在脂质学中至关重要,但因样品制备变化,矩阵效应和仪器非线性而受到挑战.
• *现有的同位素标记的内部标准 (IS) 对哺乳动物脂质组的覆盖范围有限,阻碍了全面的分析.
• * 脂质的化学多样性使复杂的生物样本中的准确识别和量化变得复杂.

研究的目的:

• * 探索在微生物物种中使用体内13C标签作为13C标签内部标准 (13C-ISs) 的来源,以改善脂管学.
• * 确定最佳的微生物来源,以产生全面的13C-IS脂质混合物,以获得精确的LC-MS基脂质组学.
• *评估生物生成的13C-ISs在正常化数据和降低脂管学研究中的变异性方面的有效性.

主要方法:

• * 在四种微生物物种中采用了体内13C标签策略:大肠杆菌 (Escherichia coli),状螺旋菌 (Arthrospira platensis),大肠杆菌 (Saccharomyces cerevisiae) 和牧羊 (Pichia pastoris).
• *分析标记物种的提取物,以确定均标记脂质的百分比.
• * 采用了来自最佳微生物来源的13C-IS脂质混合物,用于LC-MS脂管学中的数据正常化.

主要成果:

• * 皮奇亚牧草和Saccharomyces cerevisiae提取物呈现出最高百分比的均标记的脂质 (83%).
• *P. pastoris提取物被确定为13C-IS的最佳来源,用于全面的数据规范化.
• *使用生物生成的13C-IS脂质混合物,与其他规范化方法相比,显著降低了脂质变化系数 (CV%).

结论:

• * 一种体内13C标记策略提供了一种有效的手段,可以为脂管学产生多样化的13C-IS.
• * 生物生成的13C-IS,特别是来自P. pastoris,提高了数据规范化的准确性,并减少了LC-MS脂管学中的技术变异性.
• *这种方法提高了全面的脂管学分析的可靠性和定量准确性,特别是在大型样本集和长期研究中.