一个二硫化物伴奏敲除方便旋转标记和脉冲EPR光谱外膜传送器的外部膜传送器
Viranga W Wimalasiri1, Kinga A Jurczak1, Monika K Wieliniec1
1Department of Chemistry and Center for Membrane Biology, University of Virginia, Charlottesville, Virginia, USA.
Protein science : a publication of the Protein Society
|June 14, 2023
概括
研究人员使用脉冲电子磁共振 (EPR) 来研究细菌载体. 通过修改蛋白质表达系统,他们改善了体内和体外维生素B12和铁酸盐载体的测量.
科学领域:
- 生物物理学的生物物理.
- 结构生物学 结构生物学
- 微生物学 微生物学
背景情况:
- 脉冲电子磁共振 (EPR) 光谱是一种强大的技术,用于确定蛋白质内的距离.
- 在体内蛋白质标记EPR需要特定的基因工程,特别是膜蛋白.
- 以前的研究表明,缺乏二硫化键形成 (Dsb) 的大肠杆菌菌株对于有效的体内标记BtuB载体是必要的.
研究的目的:
- 调查体内和体外脉冲EPR测量对大肠杆菌铁酸盐载体 (FecA) 的可行性.
- 使用EPR评估细胞环境对FecA结构的影响.
- 评估DsbA缺乏菌株对改善外膜蛋白的EPR分析的有用性.
主要方法:
- 缺乏二硫化键形成的工程大肠杆菌菌株 (DsbA减去菌株).
- 在体内和体外对FecA和BtuB蛋白质进行旋转标记.
- 脉冲EPR光谱仪用于距离测量.
- 将净化蛋白质复合成脂双层.
主要成果:
- 在DsbA缺乏的菌株中实现了有效的FecA在体内自旋标记和脉冲EPR测量.
- 与重建系统相比,细胞环境似乎影响了FecA细胞外环的构造.
- DsbA缺乏菌株的表达增强了BtuB的体外EPR信号,并揭示了以前未观察到的分子间BtuB-BtuB相互作用.
结论:
- 缺陷的二硫化键形成系统 (DsbA减去菌株) 对于成功的体内和体外脉冲EPR研究对大肠杆菌外膜载体至关重要.
- 细胞环境对外膜蛋白质的结构和动态产生重大影响.
- 这种方法有助于在复制系统中研究蛋白质与蛋白质相互作用.
