快速,可扩展的组合基因组工程,通过无标记剂的丰富和酵母中的基因工程基因位点的再组合
Mudabir Abdullah1, Brittany M Greco1, Jon M Laurent2
1Centre for Applied Synthetic Biology, Department of Biology, Concordia University, 7141 Sherbrooke St. W, Montreal, QC, Canada.
Cell reports methods
|June 16, 2023
概括
我们开发了一种无标记基因组编辑方法,称为MERGE (无标记基因工程基因位点的无标记丰富和再组合) 用于酵母. 这种基于CRISPR-Cas9的方法有效地结合了多个基因编辑,使复杂的基因工程成为可能.
科学领域:
- 合成生物学 合成生物学
- 分子生物学分子生物学
- 酵母遗传学 酵母遗传学
背景情况:
- 在酵母中结合多个基因编辑是复杂的,因为结合的挑战.
- 现有的方法通常依赖于选择标记,使菌株结构复杂化.
研究的目的:
- 开发一种精确的,无标记物,多部位的酵母基因组编辑方法.
- 为了使多个工程遗传局部的高效集成和重组.
主要方法:
- 利用CRISPR-Cas9进行有针对性的双链断裂 (DSB) 生成.
- 集成的DSB生成与同质导向重组和酵母性分类.
- 开发了基因工程基因位点 (MERGE) 系统的无标记剂丰富和再组合.
主要成果:
- 在将单个异质基位转化为同胞基位的过程中,MERGE实现了~100%的效率,不论染色体的位置如何.
- 证明了MERGE在组合多个位点和识别相容的基因型方面的效率.
- 成功地将一种真菌类胡卜素生物合成途径和一个人类α-蛋白酶核转化为酵母.
结论:
- MERGE提供了一个强大的工具,用于在酵母中进行可扩展的组合基因组编辑.
- 这种方法简化了复杂的工程酵母菌株的构建.
- 奠定了在酵母中先进合成生物学应用的基础.


