用糖醇冷保存人类大脑微血管内皮细胞
Lanah Mohammed1, Leah A Marquez-Curtis2, Janet A W Elliott2
1Department of Cell Biology, University of Alberta, Edmonton, AB, Canada.
Cryobiology
|June 16, 2023
概括
这项研究利用糖醇优化了人类大脑微血管内皮细胞 (hCMEC) 的冷保存,实现了高解后活力. 这改善了对血脑屏障的研究,提供了更安全,更明确的细胞保存方法.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 低温生物学 低温生物学
- 生物医学工程 生物医学工程
背景情况:
- 人类大脑微血管内皮细胞 (hCMEC) 对于血脑屏障研究至关重要.
- 目前的冷保存方法使用有毒的二甲基硫氧化物 (Me2SO) 和未定义的胎儿牛血清 (FBS).
- 降低Me2SO和FBS度对于更安全,更明确的细胞保存至关重要.
研究的目的:
- 为了验证 Calcein AM/propidium iodide 染色作为 SYTO13/GelRed 的替代品,以评估冷保存后的 hCMEC 活力.
- 调查糖醇作为hCMEC的无毒冷保护剂 (CPA).
- 为了开发一个优化的冷保存协议hCMEC使用糖.
主要方法:
- 使用5%的Me2SO和6%的基乙烯粉 (HES) 进行hCMEC的重复冷保存,并用素AM/酸染色.
- 对hCMEC冷保存的糖醇度,加载时间和冷却速度的系统评估.
- 使用Matrigel管形成试验和ZO-1免疫细胞化学对冷保存的hCMEC的功能评估.
主要成果:
- 素AM/化物染色证实了与以前方法相比的可行性.
- 使用10%甘油,在室温下加载1小时,控制冷却的优化方案,导致87.7%±1.8%的解后生存率.
- 冷保存的hCMEC保持了膜完整性,细胞活力和功能.
结论:
- 糖醇是一种有效的非毒性CPA用于hCMEC冷保存.
- 开发的协议为保存hCMEC提供了一个更安全,更明确的替代方案.
- 优化的冷保存提高了用于血脑屏障研究的功能性hCMEC的可用性.
