使用低分区数字PCR技术检测化学抗原受体T细胞载体的高灵敏度试验的验证

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 在瘤学瘤学.

背景情况:

• 化学抗原受体 (CAR) T细胞疗法需要体内监测疗效.
• 对CAR T细胞移植,扩张和持久性的定量监测不是标准的临床实践.
• 现有的方法在超敏感的CAR构造检测方面面临技术限制.

研究的目的:

• 开发和验证用于超敏感检测CAR构造的数字PCR试验.
• 克服低分区数字PCR平台的局限性.
• 为了使CAR T细胞治疗的常规临床监测.

主要方法:

• 为特定的CAR结构 (axicabtagene,brexucabtagene,MSK) 设计的起料和探头.
• 在Bio-Rad数字PCR平台上进行验证的测定,与Raindrop (高分区系统) 相比.
• 修改了高DNA输入 (高达500 ng) 的协议,并使用双输入反应进行分析.

主要成果:

• 实现了CAR构造的超敏感检测到1 x 10^-5 (0.001%) 以高精度和可重复性.
• 在53个临床样本中成功监测了CAR T细胞扩张 (6-28天) 和长期持久性 (长达479天).
• 检测到的CAR载体水平从0.005%到74%,与高水平与细胞因子释放综合征相关,并预测疾病进展.

结论:

• 开发的数字PCR试验提供了对CAR T细胞结构的超敏感和准确监测.
• 这种测定克服了技术限制,可以在常规临床实践中实施.
• 监测CAR T细胞持久性对于评估治疗疗效和预测患者结果至关重要.