通过全细胞改性免疫球蛋白捕获试验 (mICA) 提高人类单克隆抗体克隆效率
Sara Siris1, Camilla A Gladstone1, Yanping Guo2
1Section of Paediatric Infectious Disease, Department of Infectious Disease, Imperial College London, London, United Kingdom.
Frontiers in immunology
|June 19, 2023
概括
一种经过修改的全细胞免疫球蛋白捕获试验 (ICA) 显著改善了克隆人类单克隆抗体 (hmAbs) 对抗 Streptococcus pneumoniae 和 Neisseria meningitidis 等细菌病原体的克隆. 这一进步提高了疫苗抗原的发现和对免疫反应的理解.
科学领域:
- 免疫学和疫苗学 免疫学和疫苗学
- 微生物病原体的产生
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 人类单克隆抗体 (hmAbs) 的表达克隆对于疫苗开发至关重要,有助于研究B细胞反应和识别新的疫苗抗原.
- 有效地分离特定的产生抗体的等离子细胞对于成功的hmab克隆至关重要.
- 以前使用单个蛋白质抗原的免疫球蛋白捕获测定 (ICA) 方法显示出有希望的结果,但对于更广泛的应用需要改进.
研究的目的:
- 开发和验证一种使用整个细菌细胞进行修改的免疫球蛋白捕获试验 (mICA),以改善病原体特异性血细胞的分离.
- 为了提高克隆hmAbs的精度和效率,它针对来自侵入性细菌病原体,Streptococcus pneumoniae和Neisseria meningitidis的各种抗原.
- 评估mICA方法在通过反向疫苗学2.0 (RV 2.0) 促进细菌疫苗抗原发现方面的实用性.
主要方法:
- 开发了一种新的mICA,使用甲处理的,光染色的Streptococcus pneumoniae和Neisseria meningitidis的全细胞悬浮剂.
- 一种抗CD45-streptavidin和生物素抗IgG支架被用来捕获由抗原特异性血细胞分泌的IgG.
- 单细胞分类用于从疫苗增强的个体中丰富多糖和蛋白质抗原特异性血.
主要成果:
- 通过mICA方法,对抗肺炎球菌多糖体hmAbs的克隆精度提高了约4.4倍 (约61%与标准方法的14%相比).
- 对抗脑膜炎球菌疫苗hmAbs观察到约1.7倍的改善,通过mICA的特异性约为88%,而通过标准方法的特异性约为53%.
- VDJ测序表明克隆的hmAbs反映了历史回应,多样化是由替代突变的积极选择驱动的.
结论:
- 经过修改的全细胞ICA (mICA) 协议成功地使得针对细菌病原体的多个不同的表位体的hmAbs能够被分离出来.
- 这种增强的mICA方法显著提高了用于细菌疫苗抗原发现的抗体克隆的功率和精度.
- 这些发现支持mICA在反向疫苗学2.0 (RV 2.0) 中的更广泛应用,用于识别针对侵入性细菌感染的新型疫苗候选人.
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