一个基于CRISPR/Cas9的多拷贝集成系统用于Aspergillus niger中的蛋白质生产

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 菌类学 菌类学是指菌类学.

背景情况:

• 黑色是一种重要的工业真菌,用于蛋白质生产,由于其高分泌能力.
• 增加蛋白质产量的现有方法通常涉及随机基因集成,这可能是低效的.
• 需要精确有效的方法来增加基因拷贝数量,以提高A. niger的蛋白质生产.

研究的目的:

• 开发一个多功能平台,用于针对性,多复制基因集成在Aspergillus niger.
• 通过精确控制集成基因的数量和位置来提高蛋白质生产产量.
• 为了证明这个平台在生产特定异质蛋白质方面的实用性.

主要方法:

• 工程设计的A. niger菌株最多有10个"葡萄糖胺酶着陆点" (GLS),可以替代非必需的基因.
• GLS含有高表达型葡萄糖胺酶基因 (glaA) 的促进子和终止子.
• 使用CRISPR/Cas9基因组编辑与独特的KORE序列,以在特定的GLS进行有针对性的集成.

主要成果:

• 在多个基因组站点成功创建了一个快速,有针对性的基因替代和集成系统.
• 证明了产生有兴趣的综合基因不同副本数量的菌株的能力.
• 生产的Penicillium expansum PatE:6x使用该平台的蛋白质,在10个副本的菌株中达到大约70μg·mL-1的高纯度 (近90%).

结论:

• 开发的GLS平台提供了一种强大而精确的工具,用于增强Aspergillus niger中异质蛋白质的生产.
• 这种有针对性的集成系统有助于快速的菌株开发和优化工业应用.
• 该平台的效率通过成功生产特定酶的高产量来验证.