在SpyCatcher中使用细胞透进行体成像的潜入
James Tyler1, Corie Y Ralston1,2, Behzad Rad1
1Molecular Foundry, Lawrence Berkeley National Laboratory, Berkeley, CA 94720, United States of America.
Nanotechnology
|June 19, 2023
概括
研究人员用SpyCatcher003设计了细胞透 (CPP) 融合,用于活细胞蛋白质成像. 虽然CPP增强了一些细菌的吸收,但这种方法为使用分裂蛋白系统的向体内成像提供了基础.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 蛋白质复合体的体内成像对于理解生物功能至关重要.
- 现有的以纳米体为基础的探测器可能会因为不完整的标签而遭受不完整的标签.
- 该SpyCatcher-SpyTag系统提供不可逆转的共价结合,克服纳米体的限制.
研究的目的:
- 设计和描述细胞透 (CPP) -SpyCatcher003融合作为活细胞成像的模块化探针.
- 评估CPPs在没有先前细胞透的情况下促进SpyCatcher003细胞内传递的能力.
- 评估这些探头在细菌中超分辨率显微镜的实用性.
主要方法:
- 使用SpyCatcher003.3对三种CPP (CUPID,Penetratin,pVEC) 的工程融合蛋白进行了设计.
- 使用尺寸排除色谱,动态光散射和SDS-PAGE进行蛋白质聚合的特征.
- 通过CD光谱学评估了CPP膜活性,并使用E. coli和Caulobacter crescentus中的光和Lattice SIM进行了细胞吸收.
主要成果:
- CPPs与SpyCatcher003的融合导致了二聚体和多聚体的形成;单聚体形式保留了SpyTag结合和CPP膜活性.
- CPPs没有提高SpyCatcher在大肠杆菌中的吸收率.
- 佩内特拉丁和CUPID增强了Caulobacter crescentus细胞中的SpyCatcher吸收.
结论:
- CPP-SpyCatcher003的融合可以被设计为标记活体细菌细胞内的目标.
- 这项工作为利用分裂蛋白系统为有针对性的体内成像应用奠定了基础.
- 具体的CPP显示了在某些微生物系统中增强探针传递的潜力.
