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Updated: Jul 26, 2025
11:17
Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue
Published on: July 7, 2009
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优化了从小鼠角膜中获得单细胞悬浮物的方法
Xiaodong Liu1, Shengpeng Zhang1, Yi Mao2
1Eye Institute and Affiliated Xiamen Eye Center of Xiamen University, Fujian Provincial Key Laboratory of Cornea & Ocular Surface Diseases, Xiamen, Fujian, 361002, China; School of Medicine, Xiamen University, Xiamen, Fujian, 361002, China; Fujian Provincial Key Laboratory of Ophthalmology and Visual Science, Xiamen, Fujian, 361002, China.
Experimental eye research
|June 19, 2023
概括
从小鼠角膜中优化单细胞悬浮是单细胞RNA测序 (scRNA-seq) 的关键. 第2方法,使用原酶A和素,为scRNA-seq.产生了最高的细胞活力和单细胞百分比.
科学领域:
- 眼科医生 眼科 眼科
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 单细胞RNA测序 (scRNA-seq) 对于理解健康和疾病中的组织生物学至关重要.
- 在scRNA-seq协议中,获得高质量的单细胞悬浮剂是一个重大挑战.
- 慢性眼病需要详细的细胞分析,通常使用scRNA-seq.
研究的目的:
- 优化一种消化整个小鼠角膜以获得单细胞悬浮物的方法.
- 评估五种不同的消化方案,以评估它们在为scRNA-seq.q.制备角膜单细胞悬浮剂中的有效性.
主要方法:
- 测试了五种不同的协议,涉及酶消化 (素,原酶A,TrypLE) 和机械干扰.
- 细胞活力,单细胞百分比,细胞产量和上皮细胞率使用Trypan蓝色染色和免疫光测定.
- 使用Agilent 2100生物分析仪测量了RNA完整性.
主要成果:
- 方法2 (5 mg/ml 原酶A,其次是素) 显示出优异的性能,细胞活力超过90%,单细胞百分比为89.53%,细胞产量高 (1.05 × 10^5).
- 其他方法显示细胞活力较低,细胞聚合率较高 (高达20%) 和上皮细胞百分比较低.
- 第1方法产生了最低的细胞数量和活力,使其不适合scRNA-seq.
结论:
- 使用5毫克/毫升的原酶A和素 (方法2) 的优化方案在制备小鼠角膜单细胞悬浮剂方面非常有效.
- 这种方法满足了成功下游单细胞RNA测序应用的严格要求.
- 这些发现为研究人员在单细胞水平上研究眼组织提供了可靠的协议.
