成功地用非病毒性病例载体对USH2A进行大基因增强

科学领域:

• 眼科和遗传学 眼科和遗传学
• 基因治疗和载体开发

背景情况:

• 在USH2A基因的突变是自体逆性视网膜色素炎 (RP) 和阿舍尔综合征的主要原因.
• 目前使用腺相关病毒 (AAV) 载体的基因增强疗法受到它们无法容纳大型cDNA的限制,例如全长USH2A编码序列 (15.6kb).

研究的目的:

• 开发一种新的基因疗法载体,能够提供全长的人类USH2A编码序列.
• 为了评估脚手架/矩阵附着区域 (S/MAR) DNA等离子体载体在治疗USH2A相关的视网膜疾病方面的疗效.

主要方法:

• 产生大约23kb的S/MARDNA等离子体载体,其中包含全长的人类USH2A编码序列,GFP记者和无处不在的促进体 (CMV或CAG).
• 在转染的HEK293细胞和USH2A患者衍生的纤维细胞中评估载体性能.
• 在ush2a^u507斑马鱼微注射在单细胞阶段的体内测试.

主要成果:

• 在患者纤维细胞中,S/MAR-USH2A载体显示了持续的转基因表达和乌舍林蛋白的恢复.
• 在接受治疗的斑马鱼中,在光受体细胞中观察到持续的GFP表达十二个月.
• 在ush2a^u507斑马鱼的视网膜中实现了阿舍尔2复杂局部的功能性救援.

结论:

• 这项研究报告了第一个能够表达全长乌舍林的载体系统,在疾病模型中实现了功能性救援.
• S/MAR DNA 载体代表了一种有前途的新型非病毒方法用于视网膜基因疗法,特别是在像 USH2A.这样的大基因引起的疾病中.
• 对于阿舍尔综合征和视网膜色素炎,S/MAR DNA 载体的进一步翻译性发展是有必要的.