重组IL-1Ra在Aspergillus oryzae中的表达和表征作为一个系统
Lena Mahmoudi Azar1,2,3, Elif Karaman1,4, Burcu Beyaz5
1Beykoz Institute of Life Sciences and Biotechnology, Bezmialem Vakif University, Beykoz, Istanbul, 34820, Turkey.
BMC biotechnology
|June 20, 2023
概括
这项研究产生了一种稳定,功能性的介素-1受体对抗剂 (IL-1Ra) 在Aspergillus oryzae. 这种重组IL-1Ra提供了一个具有成本效益的,工业上可扩展的替代品,而不是目前的大肠杆菌表达版本.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 介素-1受体对抗剂 (IL-1Ra) 是抑制介素-1 (IL-1) 活性的关键.
- 目前大肠杆菌表达的IL-1Ra (Anakinra) 由于其半衰期短,具有局限性.
- 需要工业规模的,具有成本效益的功能IL-1Ra的生产.
研究的目的:
- 开发一个具有成本效益的,工业规模的生产方法,用于功能IL-1Ra.
- 为了在Aspergillus oryzae的pyrG附属植物中表达IL-1Ra.
- 为了描述Aspergillus oryzae表达的IL-1Ra (Asp. IL-1Ra). 这样一来,我们就有了 IL-1Ra.
主要方法:
- 再组合IL-1Ra被表达在阿斯伯吉洛斯菌中.
- 净化Asp. 的净化. 使用离子交换和尺寸排除色谱的IL-1Ra.
- 对大肠杆菌IL-1Ra的生物活性,结合动力学和半衰期的比较分析.
主要成果:
- 亚斯普. 这样. IL-1Ra在53mg/L成功净化,并被发现是N-糖化和大约17kDa.
- 亚斯普. 这样. 在低度 (0.5nM) 时IL-1Ra表现出良好的生物活性.
- 亚斯普. 这样. 与大肠杆菌IL-1Ra相比,IL-1Ra在体外表现出显著更高的稳定性,尽管结合亲和力低100倍.
结论:
- 在Aspergillus oryzae中产生了功能性和稳定的复合IL-1Ra.
- 亚斯普. 这样. IL-1Ra提供了具有成本效益的工业规模生产的潜力.
- 这是首次报告在Aspergillus oryzae中表达的复合功能IL-1Ra.
