在瘤衍生的细胞外囊中检测CRISPR/Cas13a基的微RNA
Jae-Sang Hong1, Taehwang Son1, Cesar M Castro1,2
1Center for Systems Biology, Massachusetts General Hospital, Boston, MA, 02114, USA.
Advanced science (Weinheim, Baden-Wurttemberg, Germany)
|June 21, 2023
概括
这项研究引入了一种新的CRISPR/Cas13a系统,用于在没有RNA提取的情况下直接检测细胞外囊泡 (EV) 中的microRNAs (miRNAs). 这种方法准确量化特定的EV miRNA,有助于癌症诊断和监测.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 纳米技术纳米技术
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 中的微RNA (miRNAs) 在癌症发育中至关重要.
- 精确量化EVmiRNAs对于癌症诊断和监测至关重要.
- 现有的基于PCR的EV miRNA分析方法很复杂,只提供批量测量.
研究的目的:
- 开发一种无放大和无提取的方法来量化完整的EV中的特定miRNA.
- 为了利用在脂质体内封装的CRISPR/Cas13a传感系统来检测EV微RNA.
- 为了使单个EV中蛋白质和RNA标记物的多重分析.
主要方法:
- 含有CRISPR/Cas13a组件的脂质体与EVs进行了融合.
- 使用CRISPR/Cas13a系统量化了特定的miRNA阳性EV计数.
- 多重复合分析涉及捕获EpCAM阳性EV和在子群体中量化miR-21-5p.
主要成果:
- 该方法准确量化了与良性细胞 (<0.65%) 相比,在卵巢癌EV中 (2%-10%) 的特定miRNA阳性EV计数 (例如,miR-21-5p).
- 结果显示与黄金标准RT-qPCR方法的良好相关性.
- 与健康对照人群相比,从癌症患者的血中检测到升高的miR-21-5p水平.
结论:
- 开发的CRISPR/Cas13a系统提供了一种直接的,敏感的方法,用于在完整的EV中检测特定的miRNA,而无需提取RNA.
- 这种方法促进了EV miRNAs的准确量化,用于癌症诊断和监测.
- 该系统为多重单一EV分析提供了可能性,将蛋白质和RNA标记物检测结合起来.
