延迟PBMC处理对功能和基因组测定的影响

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 临床试验 临床试验

背景情况:

• 周围血液单核细胞 (PBMC) 对于临床试验中的免疫学研究至关重要.
• 及时处理血液样本对于保持PBMC完整性和功能至关重要.
• 后勤延误可能超过24小时,可能会影响下游测试结果.

研究的目的:

• 调查处理延迟对PBMC可行性,功能和下游测试性能的影响.
• 评估延长化时间如何影响PBMC免疫类型,基因表达和细胞因子分泌.
• 为在临床试验环境中优化PBMC处理提供建议.

主要方法:

• 在PBMC隔离之前,从20名健康成年人的全血样本在20-25°C下进行了2-48小时的化.
• 进行了PBMC活力,流细胞计免疫型,单细胞RNA测序 (scRNA-seq) 和ELISpot测试.
• 使用RosetteSepTM套件评估了颗粒细胞污染的影响.

主要成果:

• 在48小时的延迟后,PBMC活力下降;在24小时的延迟后,颗粒细胞污染增加.
• 在24小时的延迟后,scRNA-seq显示基因表达相关性下降 (<0.8).
• 炎症和扩散途径增加,而IFN-γ和代谢途径随着更长的延迟而下降.
• 埃利斯波特测定显示了 IFN-γ 分泌量减少的趋势,处理延迟增加.

结论:

• 处理延迟显著影响PBMC功能和基因表达特征.
• 长时间的延迟损害了下游测试的可靠性,例如scRNA-seq和ELISpot.
• 尽量减少PBMC处理延迟对于减少可变性和确保临床试验中准确结果至关重要.