在海水样本中,使用多重滴滴数字PCR与一氧化相结合的可活性Vibrio cholerae的绝对量化

科学领域:

• 环境微生物学环境微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 水质监测 监测水质 监测水质

背景情况:

• 有毒性 Vibrio cholerae O1 和 O139 导致全球霍乱流行.
• 霍乱病毒通过便-口腔途径传播,因此需要环境监测.
• 检测可行的V.cholerae的传统方法是耗时的.

研究的目的:

• 开发一种用于定量检测活体V.cholerae O1/O139和霍乱肠毒素的新型检测方法.
• 为了将三倍滴滴数字PCR (ddPCR) 与单 (PMA) 治疗相结合.
• 评估试验的特异性,灵敏度和检测可行的细菌衍生DNA的能力.

主要方法:

• 专门为V. cholerae O1 (rfb O1),O139 (rfb O139) 和霍乱肠毒素 (ctxA) 设计的初始剂和探针.
• 优化了三倍式ddPCR放大程序和PMA治疗条件.
• 在模拟的海水样本中评估了PMA-ddPCR测定.

主要成果:

• 确定了原料/探针度,回火温度和PMA处理的最佳条件.
• 在纯培养和海水中,活体V. cholerae O1/O139和ctxA的检测极限 (LOD) 显著低.
• 与PMA-qPCR相比,PMA-ddPCR在检测的海水样本时显示出大约10倍的灵敏度和完美的特异性.

结论:

• 开发的PMA-triplex ddPCR测定方法具有高度灵敏度,并且专门用于检测可行的有毒性V. cholerae O1和O139.
• 这种方法提供了一个快速而准确的替代方案,用于监测环境水中的V.霍乱常规技术.
• 该试验适用于在可疑的海水样本中快速检测可行的毒性V.cholerae.