[克隆和表达分析Panax quinquefolius中的U6促进体]
Jing-Xian Chen1, Chao Lu2, Guo-Xia Wang2
1School of Life Science, Zhengzhou Normal University Zhengzhou 450000, China Central Mindanao University College of Arts and Sciences Musuan 8710, Philippines.
概括
在Panax quinquefolium中发现了七种新的U6促进体,在CRISPR/Cas9应用中显示出显著的转录活性. 这些内源性促进剂为人参和其他药用植物的基因工程提供了改进的工具.
科学领域:
- 植物分子生物学 植物分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 基因规则 基因规则
背景情况:
- 在CRISPR/Cas9基因编辑系统中,U6促进体对于驱动sgRNA转录至关重要.
- 识别特定于植物的U6促进体对于优化各种物种的基因编辑效率至关重要.
研究的目的:
- 从Panax quinquefolium (ginseng) 中克隆和表征新的U6促进子序列.
- 评估这些内源性促进体的转录激活能力.
- 在人参和其他药用植物中提供适合CRISPR/Cas9应用的U6促进剂.
主要方法:
- 克隆了七个PqU6促进子序列 (大约. 1300 bp) 来自Panax quinquefolium的gDNA. 这是一个很好的例子.
- 促进子序列特征的生物信息分析,包括USE和TATA框.
- 构建GUS记者基因融合表达载体.
- 烟草叶和Panax quinquefolium callus的Agrobacterium tumefaciens介导的转化用于活动检测.
- 发起者的截断分析以确定最少活跃的地区.
主要成果:
- 七个PqU6促进子序列 (1246-1308 bp) 已成功克隆,并与AtU6-P表现出序列相似性,包括基本的USE和TATA盒.
- 所有七种PqU6促进体都表现出转录活性,由GUS染色和酶试验证实.
- PqU6-7P (1269 bp) 显示了最高的活动 (1.31x P-35S控制).
- 截断的PqU6-7PA (283 bp) 在Panax quinquefolium callus中表现出比AtU6-P高1.59倍的活动.
结论:
- 已识别的PqU6促进体具有显著的转录活性.
- 在Panax quinquefolium中,PqU6-7P及其截断形式PqU6-7PA对基因表达非常有效.
- 这些新型内源性促进剂是增强人参和相关药用植物CRISPR/Cas9基因编辑的宝贵工具.
