使用混合免疫亲和捕获和微流LC-MS/MS进行抗体药物结合物的增强药理动力学生物分析

科学领域:

• 生物分析化学 生物分析化学
• 药理动力学 药理动力学
• 质谱测量质量谱测量

背景情况:

• 抗体-药物合物 (ADC) 由于其复杂性,需要先进的生物分析方法来进行药理动力学 (PK) 评估.
• 现有的方法可能需要更大的样本量,限制早期临床前研究.

研究的目的:

• 为了评估混合免疫亲和度捕获微流LC-MS/MS (μLC-MS/MS) 方法用于ADC量化.
• 评估使用最小样本体积 (1μL) 进行ADC PK研究的可行性.
• 为ADCs建立一个强大且具有成本效益的生物分析工作流.

主要方法:

• 免疫亲和 (IA) 捕获与微流液体染色学-并列质谱学 (μLC-MS/MS) 相结合.
• 固相提取 (SPE) 和半自动化,以优化工作流程.
• 对总抗体 (重链) 和完整抗体 (轻链) 的替代的量化.
• 作为ADC总度的替代品,有效载荷的量化.

主要成果:

• 已建立的抗体替代品 (1-5000 ng/mL,r2 > 0.99) 和有效载荷 (0.5-2000 ng/mL) 的标准曲线具有高精度和精度 (<10% CV).
• 在总抗体量化方面,在μLC-MS/MS和ELISA之间证明了很高的相关性 (<20%的差异).
• 与ELISA相比,μLC-MS平台显示出更高的动态范围,灵敏度,稳定性和可重复性.

结论:

• 开发的μLC-MS/MS方法可用于使用最小的血体积进行ADC生物分析.
• 这种具有成本效益的方法可以减少试剂消耗和动物样本的使用.
• 该方法提供了全面的ADC信息,包括总抗体,完整的抗体和总ADC水平.