克里斯普尔/卡斯9诱导的ASAP1a和ASAP1b联合淘汰的突变斑马鱼显示出异常的胚胎发育和中性粒细胞迁移受损
Jia Cui1, Da Wen2, Liqing Wang3
1Department of Microbiology, Changzhi Medical College, Changzhi, 046000, PR China; Institutes of Biomedical Sciences, Shanxi University, Taiyuan, 030006, PR China.
Gene expression patterns : GEP
|June 30, 2023
概括
缺少ASAP1a和ASAP1b的斑马鱼显示出发育缺陷和免疫反应受损. 这项研究为ASAP1异型建立了新的基因淘汰模型,这对于理解人类ASAP1功能至关重要.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- ASAP1 (Arf-GAP 具有 SH3 域, ankyrin 重复和 PH 域) 是一个 GTPase 激活蛋白质,用于小 G 蛋白 Arf.
- 了解ASAP1的体内生理功能需要强大的动物模型.
研究的目的:
- 用功能丧失研究来描述斑马鱼中ASAP1异型的生理功能.
- 为ASAP1a和ASAP1b建立CRISPR/Cas9生成的淘汰赛斑马鱼线.
主要方法:
- 用CRISPR/Cas9基因编辑来创建ASAP1a和ASAP1b的淘汰赛斑马鱼系.
- 使用定量逆转录PCR (qRT-PCR) 来分析基因表达补偿.
- 淘汰赛斑马鱼的表型分析,包括生存,化,形率和中性粒细胞迁移到Mycobacterium marinum感染.
主要成果:
- 在ASAP1a和ASAP1b联合淘汰赛中,斑马鱼的生存率和化率降低,发育不良的情况增加.
- 对asap1a或asap1b的单一淘汰突变体没有显示出显著的发育缺陷.
- ASAP1b表达得到了 asap1a淘汰的补偿,但不是相反的.
- 在M. marinum感染期间,共淘汰突变体表现出中性粒细胞迁移受损和细菌负载增加.
结论:
- 这项研究介绍了第一个通过CRISPR/Cas9.9生成的遗传ASAP1a和/或ASAP1b突变斑马鱼系.
- 这些斑马鱼模型是进一步对ASAP1及其在发育和免疫中的作用进行生理研究的宝贵工具.
- 这些发现突出了ASAP1异型之间的功能冗余和补偿机制.
