在PBMC隔离期间洗介质类型对SARS-CoV-2特异性T细胞下游特征的影响
Zion Congrave-Wilson1, Minjun Kim2, Aaron Sutherland3
1Division of Infectious Diseases, Children's Hospital Los Angeles, Los Angeles, CA, United States.
Journal of immunological methods
|June 30, 2023
概括
优化外围血液单核细胞 (PBMC) 隔离对于SARS-CoV-2 T细胞研究至关重要. 在PBMC隔离过程中使用带有全离心制动器的RPMI介质可以提高T细胞的反应和效率.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 隔离外周血液单核细胞 (PBMC) 的协议有所不同,影响了对SARS-CoV-2 T细胞反应的研究.
- 关于PBMC隔离方法如何影响下游T细胞激活和功能的研究有限.
研究的目的:
- 调查不同洗介质 (PBS与RPMI) 和离心条件对SARS-CoV-2 T细胞分析的PBMC隔离的影响.
- 为了比较各种PBMC隔离协议对T细胞激活和记忆表型的有效性.
主要方法:
- 来自26名参与者的血液样本使用不同的PBMC隔离方法,不同的洗介质和离心速度/制动器进行处理.
- 使用基于流细胞计的激活诱导标记 (AIM) 试验和干扰素-γ (IFNγ) FluoroSpot试验量化了SARS-CoV-2尖端特异性T细胞反应.
主要成果:
- 与PBS冲洗样本相比,RPMI冲洗的PBMC显示出较高的CD4T细胞激活 (AIM+) 和向效应记忆表型的转变.
- RPMI洗增加了CD4 T细胞的OX40上调,而CD137上调显示出最小的差异.
- PBS洗增加了背景CD8T细胞激活 (CD69+) 和基线IFNγ产生细胞.
结论:
- 在PBMC隔离期间使用带有全离心制动器的RPMI介质是最有效和高效的,以保持T细胞活性.
- 需要进一步的研究来了解RPMI保护T细胞功能背后的机制.
