对乙辅酶A的色度,度和液体色谱-质谱测试进行比较
Daniel S Kantner1, Emily Megill1, Anna Bostwick1
1Lewis Katz School of Medicine at Temple University, Department of Cardiovascular Sciences, Center for Metabolic Disease Research, Philadelphia, PA 19140, USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|July 3, 2023
概括
通过比较乙-CoA测量方法,酶组件显示出有希望的结果,而ELISA组件则失败了. 液体染色学-质谱学试验提供了可靠的乙-CoA量化,使复杂的乙-CoA分析成为可能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 代谢学 代谢学 代谢学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 乙-协酶A (乙-CoA) 是细胞能量和生物合成中的关键代谢物.
- 准确量化乙-CoA对于理解新陈代谢调节至关重要.
- 现有的乙-CoA测量技术缺乏标准化的比较,这阻碍了数据的解释.
研究的目的:
- 为了比较商业上可用的乙-CoA测量套件的性能与基于质谱的测试.
- 评估不同定量技术的可靠性和可比性,以检测乙-CoA.
- 评估质谱法在多重化-CoA分析中的实用性.
主要方法:
- 对比色度ELISA,度酶组件,液体染色学-双重质谱学 (LC-MS/MS) 和液体染色学-高分辨率质谱学 (LC-HRMS).
- 测试使用纯标准和生物矩阵进行了测试.
- 使用LC-HRMS测定用于短链乙-CoAs的多重分析.
主要成果:
- 颜色测量ELISA套件产生了无法解释的结果.
- 度酶组件提供了与LC-MS测定相似的结果,取决于矩阵和提取.
- LC-MS/MS和LC-HRMS测定显示出高度一致性,特别是与稳定同位素标记的内部标准.
- 通过LC-HRMS,可以在白血病细胞系和患者样本中多次量化多个乙-CoA.
结论:
- 基于质谱的测定,特别是内部标准的LC-HRMS,是可靠的乙-CoA量化.
- 度酶套件可能提供一个可行的替代方案,取决于实验条件.
- 不建议使用ELISA套件进行乙-CoA测量.
- LC-HRMS是全面的乙-CoA代谢学的一个强大的工具.
