确定基于VLP的复合性乙型肝炎表面抗原下游加工的缓冲条件,使用结合-和流通净化模式的多模式树脂进行下游加工
Maryam Moazami Goodarzi1, Reza Jalalirad2, Delaram Doroud3
1Department of Research and Development, Production and Research Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, 3159915111, Iran.
Scientific reports
|July 3, 2023
概括
针对复合乙肝表面抗原 (rHBsAg) 的优化下游处理 (DSP) 显著提高了纯度和降低了成本. 这种新方法为rHBsAg净化提供了更快,更便宜,更有效的替代方案.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物化学 生化学
- 工艺工程的过程工程.
背景情况:
- 重组乙型肝炎表面抗原 (rHBsAg) 的下游加工 (DSP) 具有挑战性,因为其半净化和蛋白质特性效率低下,导致漫长和昂贵的程序.
- 目前的rHBsAg净化方法往往导致显著的杂质含量和高的加工费用.
研究的目的:
- 为了优化B型肝炎复合表面抗原 (rHBsAg) 的下游加工 (DSP),表达在Pichia pastoris.
- 通过完善半净化步骤和采用先进的净化策略,提高rHBsAg净化效率并降低净化成本.
主要方法:
- 在半净化阶段使用实验设计 (DOE) 优化缓冲条件,具体是20mM酸在pH4.5.5时.
- 基于响应表面方法的绑定-和流通净化模式的实施.
- 评估关键质量属性,包括纯度,颗粒大小,宿主细胞污染物,二次结构和生物活性.
- 在多个净化周期中评估树脂性能和耐用性.
主要成果:
- 在半净化优化过程中,蛋白质杂质减少了高达73%,rHBsAg纯度增加了3.6倍.
- 通过使用优化的结合-和流通方法获得高纯度的rHBsAg (接近100%),回收率超过83%.
- 与传统的DSP相比,纯化rHBsAg达到或超过了质量标准,具有可比或优越的关键质量属性.
- 净化树脂表现一致的性能 (97-100%的有效性) 和耐用性超过10个周期没有显著的损坏.
结论:
- 开发的DSP是一种比传统的rHBsAg净化方法更有效,更具成本效益,更短的替代方案.
- 优化的工艺产生了高质量的rHBsAg,其纯度和回收性优异,保持了树脂的有效性.
- 这种新的DSP方法可能适用于净化其他非VLP和基于VLP的酵母蛋白.
