在Drosophila S2细胞中产生的可溶性SARS-CoV-2 RBD和人类ACE2酶域显示了唤起病毒-细胞接口的功能

科学领域:

• 病毒学和免疫学 病毒学和免疫学
• 蛋白质生物化学 蛋白质生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• SARS-CoV-2尖端蛋白的受体结合域 (RBD) 与人类的ACE2相互作用,调解病毒的进入,并作为中和抗体的关键目标.
• 准确评估中和抗体反应对于疫苗开发和了解感染免疫力至关重要,特别是对于新的SARS-CoV-2变种.

研究的目的:

• 建立一个独特的,具有成本效益的协议,用于生产热稳定的SARS-CoV-2 RBD和可溶性人类ACE2 (shACE2),使用Drosophila S2细胞.
• 验证产生的蛋白质的结合亲和性和抗原性,并证明它们在开发替代病毒中和试验 (sVNTs) 中的有用性.

主要方法:

• 在Drosophila S2细胞中产生复合RBD和shACE2蛋白,然后使用Strep-tag进行净化.
• 生物物理特征包括结合亲和度测量 (K_D) 和竞争ELISA来评估抗体阻断.
• 对人类细胞上RBD与原生二维ACE2结合的评估和蛋白质微异质性的分析.

主要成果:

• 高产量 (>40毫克/升) 的热稳定RBD和shACE2与低纳米分子结合亲和力 (K_D),独立于Strep-tag的去除实现.
• 该系统证明了通过血清抗体阻断和与原生ACE2结合的概念验证,而糖化对结合的影响最小.
• 产生的蛋白质适用于内部开发sVNTs,以快速表征中和性感反应.

结论:

• 开发的Drosophila S2基于细胞的系统提供了一个可访问和可靠的工具,用于生产关键的SARS-CoV-2抗原,用于免疫学测试.
• 该平台有助于内部设计和实施代理病毒中和测试 (sVNTs),这对于监测针对当前和未来的SARS-CoV-2变种的免疫反应至关重要.
• 生物物理和生物化学表征支持该系统的适应性,用于研究不同的关注变体 (VOC) 和疫苗配方.