使用CRISPR/Cas9与光蛋白表达相结合,生成人类293-F悬浮NGFR淘汰细胞
Stefanie Schatz1,2, Femke Harmina van Dijk1, Aleksandra Elzbieta Dubiel1
1Research Group Medical Biotechnology & Bioengineering, Faculty of Applied Natural Sciences, TH Köln - University of Applied Sciences, Campus Leverkusen, Leverkusen, Germany.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|July 5, 2023
概括
研究人员使用CRISPR/Cas9.9创建了NGFR阴性HEK 293悬浮细胞. 这种方法消除了背景神经生长因子受体 (NGFR) 表达,改善了用于基因治疗的逆转录病毒载体的产生.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 基因治疗 基因治疗
背景情况:
- 人类胚胎脏 (HEK 293) 悬浮细胞对于逆转录病毒载体的产生至关重要.
- 神经生长因子受体 (NGFR) 是一个常见的记者基因,但HEK 293细胞内源性表达导致高背景.
- 这种背景阻碍了对转基因细胞的准确检测和丰富.
研究的目的:
- 为了产生HEK 293-F细胞,对内源性神经生长因子受体 (NGFR) 表达进行淘汰.
- 为了建立一个纯NGFR阴性细胞的纯种群,以改善复原病毒载体应用.
- 开发一种在细胞系中消除高背景NGFR表达的方法.
主要方法:
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,准和淘汰HEK 293-F细胞中的NGFR基因.
- 工程 Cas9 内核酶通过 2A 基因共同表达光蛋白.
- 实施了一种策略,同时消耗表达Cas9和剩余的NGFR阳性细胞.
主要成果:
- 成功生成了一个缺乏NGFR表达的人类悬浮293-F细胞群.
- 实现了表达Cas9的细胞和剩余的NGFR阳性细胞的同时耗尽.
- 获得纯的NGFR阴性细胞群,没有持久的Cas9表达.
结论:
- 克里斯普尔/Cas9系统提供了一种有效和适用的方法,用于生成NGFR-knockout HEK 293-F细胞.
- 这种方法显著降低了背景NGFR表达,增强了逆转录病毒载体的产生和基因治疗研究.
- 开发的程序产生了适合先进基因治疗应用的纯细胞群.
