对影响小鼠基因组编辑效率的因素进行有效的评估系统.

科学领域:

• 实验室动物科学实验室动物科学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 遗传学是一种遗传学.

背景情况:

• 基因组编辑对于创建遗传疾病模型和研究实验室动物的基因功能至关重要.
• 通过同类重组精确的基因敲除效率低于通过非同类末端连接的基因敲除效率,这构成了重大挑战.
• 现有的解决方案来提高敲进效率是不够的.

研究的目的:

• 建立一个强大的系统来评估小鼠基因编辑效率Tyr gene locus.
• 为了识别小分子化合物,提高精确的基因敲进效率在小鼠胚胎.
• 促进新型基因组编辑策略的选和开发.

主要方法:

• 开发了一个基因组编辑系统,利用Cas9和针对小鼠Tyr基因位点的特定捐赠者模板.
• 设计了原始基因和利用了限制片段长度多态 (RFLP) 来轻松对野生类型,淘汰和淘汰等位基因进行基因定型.
• 将H420R突变纳入铁酶中,以通过外套颜色来可视识别敲入小鼠.
• 选了各种小分子化合物,以检测它们对小鼠胚胎中敲进效率的影响.

主要成果:

• 建立的系统允许简单的体外和体内基因组编辑小鼠胚胎的基因型定型.
• 使用PCR产品的RFLP分析,可以区分野生型,淘汰型和淘汰型的基因型.
• H420R突变促进了识别具有明显外套颜色图案的敲入小鼠.
• 确定了一种特定的小分子化合物,显著提高了小鼠胚胎的敲进效率.

结论:

• 开发的基因组编辑系统是有效的评估基因编辑结果在Tyr locus.
• 该系统非常适合用于高通量选的化合物,旨在提高精确的基因敲进效率.
• 这些发现有助于推进基因组编辑技术,用于创建复杂的遗传模型.