在小鼠卵细胞中检测DNA双链断裂
Chrysoula Zorzompokou1, Marios Ipeirotis1, Marios Kaisar Martzoukos2
1Department of Biological Applications and Technology, University of Ioannina; Biomedical Research Institute, Foundation for Research and Technology.
Journal of visualized experiments : JoVE
|July 10, 2023
概括
这项研究提出了一种检测被捕卵细胞中DNA损伤的方法,这对于了解女性生育能力和预防出生缺陷至关重要. 该协议使用γH2AX跟踪DNA双链断裂 (DSB),帮助生殖生物学研究.
科学领域:
- 生殖生物学 生殖生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
背景情况:
- 卵细胞是雌性体内最大的细胞,在胚胎发育过程中在半转化I中停止,并且可以保持多年的静止状态.
- 这种延长的停产使卵细胞易受DNA损伤的影响,从而损害性质子和胚胎的遗传完整性.
- 检测DNA损伤对于理解卵细胞中DNA损伤反应 (DDR) 机制至关重要.
研究的目的:
- 描述一种用于评估预相I停止卵细胞中的DNA损伤的协议.
- 建立一种研究雌性性体内DNA损伤反应 (DDR) 的方法.
- 研究DNA损伤对卵细胞遗传完整性的影响.
主要方法:
- 切割小鼠卵巢和检索积卵细胞复合体 (COCs).
- 在M2介质中培养脱落的卵细胞,使用3-异布-1-甲基丁来维持介质停止.
- 使用埃托化物诱导DNA双链断裂 (DSB) 并通过免疫光和共聚焦显微镜检测γH2AX焦点.
主要成果:
- 成功实施了一项20小时的协议,以监测卵细胞中DNA损伤的进展.
- 定量化γH2AX作为一个标志物,以托化物诱导的DSBs在停止的卵细胞.
- 在一个关键的生殖细胞类型中研究DDR的方法的演示.
结论:
- 开发的协议能够准确地检测和量化在预相I停止的卵子细胞中的DNA损伤.
- 了解卵细胞DNA损伤和反应对于解决不孕症,出生缺陷和自发堕胎至关重要.
- 这种方法对于推进生殖生物学研究和改善女性生殖健康结果至关重要.
