通过流式细胞计量定义iNKT细胞子组及其功能
Marianthi Gioulbasani1, Ageliki Tsagaratou1,2,3
1Lineberger Comprehensive Cancer Center, University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, North Carolina.
Current protocols
|July 10, 2023
概括
本研究详细介绍了分析不变天然杀手T (iNKT) 细胞子集的方法. 它涵盖了转录因子,表面标记物和细胞因子生产的表征,在体外和体内,用于免疫反应调节.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 流动细胞计量 (Flow Cytometry) 是一种流动细胞计.
背景情况:
- 不变的自然杀手T (iNKT) 细胞是重要的免疫调节者.
- 根据转录因子和细胞因子生产,iNKT细胞可以在功能上进行细分.
- 评估这些子集是了解免疫反应的关键.
研究的目的:
- 描述用于表征iNKT细胞子集的可靠方法.
- 为了使iNKT细胞功能和子集的详细分析.
- 为ex vivo和in vivo评估提供协议.
主要方法:
- 使用基于转录因子 (例如,PLZF,RORγt) 表达的流细胞计,对小鼠iNKT子集的表征.
- 通过下游分子分析的表面标记物表达来识别iNKT子集 (RNA-seq, ATAC-seq, WGBS).
- 通过体外激活 (PMA/ionomycin) 和体内激活 (α-galactosyl-ceramide) 的功能评估,然后进行细胞因子分析 (IFNγ,IL-4).
主要成果:
- 建立了基于转录因子和表面标记物的iNKT细胞子集区分的协议.
- 在体外和体外激活后评估iNKT细胞细胞因子生产的证明方法.
- 提供了一种全面的方法来分析各种组织的iNKT细胞子集.
结论:
- 描述的方法允许详细描述iNKT细胞子集的特征.
- 这些协议有助于研究iNKT细胞在免疫调节中的功能.
- 这些方法支持下游分子分析,以深入了解iNKT细胞生物学.
