扩展和CRISPR-Cas9基因组编辑小鼠MAIT细胞的协议,用于随后的体内研究
Anastasia du Halgouet1, Aurélie Darbois2, Aurélia Alphonse2
1INSERM U932, PSL University, Institut Curie, 75005 Paris, France; National Institute of Dental and Craniofacial Research, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20892, USA.
STAR protocols
|July 11, 2023
概括
这项研究提出了一种简化方案,用于产生淘汰赛小鼠,特别针对粘膜相关的不变T细胞. 该方法涉及体外扩张和CRISPR-Cas9基因编辑,以有效地修改目标分子.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 生成基因改造的小鼠模型,特别是针对特定的免疫细胞群体,如粘膜相关的不变T细胞,往往受到时间和成本限制的阻碍.
- 缺少子集特异性促进体使得在不同的T细胞群体中复杂化向基因淘汰策略.
研究的目的:
- 开发一种高效且具有成本效益的协议,用于产生针对特定T细胞种群的淘汰小鼠.
- 通过使用CRISPR-Cas9技术,使粘膜相关的不变T细胞能够进行向基因修饰.
主要方法:
- 来自小鼠胸腺的粘膜相关的不变T细胞的丰富.
- 在实验室中丰富的T细胞的扩张.
- 在扩展的T细胞中,CRISPR-Cas9介导的基因淘汰.
- 在受伤的免疫缺陷小鼠体内注射淘汰细胞.
- 皮肤内注射细胞的特征.
主要成果:
- 成功丰富和体外扩张粘膜相关的不变T细胞.
- 在这些细胞中,有效的CRISPR-Cas9中介敲除了这些细胞中的点分子.
- 证明该协议适用于生成淘汰小鼠模型的应用性.
结论:
- 描述的协议提供了一种可行的方法,用于在特定的T细胞子集中产生杀性小鼠的有针对性的修改.
- 这种方法可以加速需要转基因免疫细胞的研究,克服以前的时间和费用限制.
