针对特定部位的抗体合成-[60]用于细胞向的富勒-寡核酸合物

科学领域:

• 生物结合化学 生物结合化学
• 纳米技术 纳米技术
• 分子治疗学分子治疗学

背景情况:

• 开发理想的抗体-寡核酸合物 (AOC) 需要具有高寡核酸 (ON) 有效载荷和保留抗体 (Ab) 结合的统一结构,以实现向传递.
• 特定地点的结合对于创建具有可预测性质的同质AOC至关重要.
• 基于富勒烯的分子球状核酸 (MSNA) 为密集的ON加载提供了一个有前途的平台.

研究的目的:

• 通过特定部位的结合,合成统一的抗体-MSNA结合物 (MSNA-Ab).
• 描述合成的MSNA-Ab结合物的物理化学性质和抗原结合能力.
• 评估MSNA-Ab结合物的细胞向,内化和生物效应.

主要方法:

• 使用甘氨酸工程和点击化学,对[60]富勒基MSNA与抗体进行特定位点的结合.
• 生物层干涉测量以评估抗原结合亲和力 (特拉斯图苏马布与HER2).
• 活细胞光和相对照显微镜用于评估HER2过度表达乳腺癌细胞的Ab介导内细胞分裂 (BT-474).
• 无标签的活细胞时间延迟成像,以分析对细胞增殖的影响.

主要成果:

• 统一的MSNA-Ab合物 (∼270kDa) 已成功合成,ON:Ab比率为24:1和分离产量为20-26%.
• 该AOC维持了Trastuzumab对HER2的特定结合,这是通过生物层干扰测量证实的.
• 在HER2阳性BT-474细胞中观察到Ab介导的内细胞分裂,表明有针对性的细胞吸收.
• 对细胞增殖效应的初步分析使用无标签成像进行.

结论:

• 基于富勒的MSNA与抗体的局部特异性结合产生了统一且功能性的抗体-寡核酸结合物.
• 这些新型AOC表现出保留的抗原结合特性和高效的抗体介导的细胞向和吸收.
• 开发的MSNA-Ab平台具有针对性提供寡核酸治疗药物的潜力.