用于从HEK 293细胞溶解物中净化腺相关病毒的亲和性纯化类联体

科学领域:

• 生物技术和生物加工
• 基因治疗 矢量净化 基因治疗 矢量净化
• 蛋白质工程和亲和染色学

背景情况:

• 基因相关病毒 (AAV) 是基因治疗的关键载体,临床使用和监管批准日益增加.
• 目前的AAV净化依赖于与蛋白质配体 (例如,驼类抗体) 的亲和树脂,这些树脂在生物化学稳定性,成本和化条件 (pH < 3) 中表现出局限性.
• 恶劣的化条件可能会对纯化AAV载体的转导活性产生负面影响.

研究的目的:

• 开发用于选择性AAV捕获和轻度化 (pH 6.0) 的新型配体.
• 为了克服目前用于AAV净化的基于蛋白质的亲和吸收剂的局限性.
• 为了改善AAV基因疗法载体的恢复和维持转导活性.

主要方法:

• 对聚焦库的选,以识别向AAV血清型2和9 (AAV2,AAV9) 的配体.
• 在模拟中,选择与适当亲和度 (K_D ~10^-5 -10^-6 M) 的AAV病毒蛋白质上与保存位点结合的.
• 选择的酸与Toyopearl树脂的结合,并评估结合能力,产量和净化性能与细胞溶解物中的AAV2相比.

主要成果:

• 配方体证明了对AAV2和AAV9的选择性捕获,具有动态结合能力 (DBC<10%>) >10^{13vp/mL,产品产量为50%-80%.}
• 从HEK 293细胞溶解物净化AAV2实现了高回收率 (50%-80%),显著减少宿主细胞蛋白质 (80至400倍),并保持了高转导活性 (高达80%).
• 基于的吸附剂的性能与商业吸附剂相当,但在明显较温和的化条件下.

结论:

• 新型配体能够有效和选择性地净化腺相关病毒.
• 开发的基于的亲和性染色体平台为当前方法提供了一个有前途的替代方案,保留了AAV载体的完整性和活性.
• 这种方法促进了用于基因治疗应用的高质量的AAV载体的生产.