双标签方法可视化和量化膜相关蛋白质在乳球菌乳糖

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 经过工程改造以显示重组蛋白质的乳球菌提供了作为一种活细胞药物递送载体的潜力,用于粘膜和口服.
• 作为载体的有效使用需要对抗原进行定量控制,并彻底了解细菌蛋白质加工机制.

研究的目的:

• 开发一种用于同时检测和量化L. lactis细胞表面和细胞质中的蛋白质的方法.
• 确认L. lactis. 膜相关蛋白质的分泌途径.

主要方法:

• 一种双标记技术,使用特定于多西丁标签 (表面蛋白) 和四半氨酸标签 (细胞质蛋白) 的结合染料.
• 一种阻止表面暴露的四半氨酸标签标记的方法,以确保特定位置的信号.
• 该方法用于在L. lactis.中建模HtrA和BmpA蛋白的应用.

主要成果:

• 在细胞表面和细胞质中同时检测和量化向蛋白质.
• 检测到HtrA和BmpA的全长链,证实它们通过不同的模式与细胞膜的关联.
• 证实了Sec-依赖的翻译后途径,用于L. lactis中膜相关蛋白质的分泌.

结论:

• 开发的双重标记方法为监测L. lactis细胞质蛋白生产,出口和表面附着提供了一个方便的工具.
• 这种方法有助于优化L. lactis用于细胞表面显示应用和活细胞药物输送.