来自细菌的乳酸脱酶Plasmodium vivax的表达,净化和表征,没有Codon优化

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 寄生虫学的寄生虫学

背景情况:

• 在全球范围内,Plasmodium vivax是疟疾的主要原因.
• 活菌的乳酸脱酶 (PvLDH) 对于寄生虫的生存至关重要,也是抗疟疾疗法的目标.

研究的目的:

• 在细菌系统中过度表达和净化Plasmodium vivax乳酸脱酶 (PvLDH).
• 描述复合PvLDH的功能性和结构性质.

主要方法:

• 将PvLDH基因克隆到pET-21a(+) 载体中.
• 通过重组等离子体转化大肠杆菌罗塞塔 (E. coli Rosetta) ......DE3.
• 优化表达条件 (时间,温度,诱导剂度).
• 净化和描述表达的PvLDH蛋白质.

主要成果:

• 高产量 (31.0 mg/L) 和纯度 (>95%) 的PvLDH是从大肠杆菌罗塞塔 (E. coli Rosetta) 获得的.
• 表达的PvLDH蛋白显示出其特有的四聚体结构.
• 纯化的PvLDH表现出显著的酶活性.

结论:

• 这项研究成功地建立了一种在E.大肠杆菌中产生功能性PvLDH的方法,而无需对子进行优化.
• 这些发现支持PvLDH作为抗疟疾药物开发和诊断生物标志物的可行目标.
• 这项研究为进一步研究传染病和与P. vivax疟疾相关的代谢提供了基础.