在瓜子 (Cucumis melo L.) 中使用改进的转换程序进行CRISPR/Cas9介导的细胞因子基编辑
Hadi Shirazi Parsa1,2,3, Mohammad Sadegh Sabet3, Ahmad Moieni3
1Université Paris-Saclay, CNRS, INRAE, Université Evry, Institute of Plant Sciences Paris-Saclay (IPS2), 91190 Gif sur Yvette, France.
优化瓜子转化涉及特定的注射和共同培养条件,显著提高效率. 这种增强的协议可以使用CRISPR/Cas9技术在西瓜植物中进行稳定的基因编辑.
科学领域:
- 植物生物技术 植物生物技术
- 农业科学 农业科学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 与其他作物相比,瓜子 (Cucumis melo) 的基因转换效率较低.
- 开发高效的转化协议对于瓜子作物改进和遗传研究至关重要.
研究的目的:
- 优化瓜子遗传转换中的关键参数,重点关注接种和共同培养的步骤.
- 为了提高各种瓜子品种的转化效率.
- 使用CRISPR/Cas9.9应用优化的协议来生成稳定的基因编辑西瓜线,使用CRISPR/Cas9.
主要方法:
- 在接种过程中优化扩散剂浸泡时间.
- 共同培养条件的完善,包括过纸,MES度和温度.
- 乙烯抑制剂和吸收剂的应用.
- 使用Clustered定期间隔的短palindromic重复/CRISPR相关蛋白9 (CRISPR/Cas9) 中介的细胞因子基编辑.
主要成果:
- 在注射介质中浸泡20分钟的爆炸剂显著提高了转化效率.
- 最佳的共同培养涉及过纸,10 mM MES和24 °C.
- 乙烯抑制剂/吸收剂在测试的瓜子品种中提高了转化率.
- 实现的转换效率在3.73%至4.83%之间.
- 生成的双胞胎转基因瓜子和稳定的基因编辑线,在*CmeIF4E*基因中进行C-to-T和C-to-G编辑.
结论:
- 优化的西瓜转换协议显著提高了效率.
- 该协议与CRISPR/Cas9基编辑相结合,为瓜子的功能基因工程提供了一种可靠的方法.
- 这些进展有助于基因研究和瓜子作物改进.
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